常規(guī)病理染色實驗代測的樣本包埋與固定

HE染色實驗

HE染色法，即是蘇木精-伊紅染色法。石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)分別稱為嗜堿性和嗜酸性；若于兩種染料的親和力都不強，則呈中性。一般的組織變化和組織產(chǎn)物都可以通過這一染色法顯示出來。是形態(tài)學的染色方法。

染色結(jié)果：細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色，軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍色，粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈橘紅色，蛋白性液體呈粉紅色。

樣本包埋與固定

（1）固定：根據(jù)需要取材后置于福爾馬林中固定48小時后；

（2）洗滌與脫水：將固定后的組織用流水沖洗，去除殘留的固定液和雜質(zhì)。不同濃度的乙醇逐級脫水，50%、70%、85%、95%直至純酒精（無水乙醇），每級2小時。70%乙醇中可長期保存；

（3）透明：50%酒精+50%二甲苯中2小時，純二甲苯兩小時，再一次純二甲苯兩小時；

（4）浸蠟：先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1～2小時，再先后移入2個熔化的石蠟液中浸漬各3小時左右；

（5）包埋：將浸好蠟的組織塊放入裝有蠟液的容器中，擺好組織塊位置。待石蠟凝固后將周圍多余的石蠟去除，準備切片；

（6）切片：將切片刀裝在刀片機的刀架上并固定緊，固定蠟塊底座或蠟塊，調(diào)整蠟塊與刀至合適位置，刀刃與蠟塊表面呈5度角。調(diào)整切片機上的切片厚度為4-7μm，然后切片。

HE染色

（1） 脫蠟：60℃、30min；二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ；

（2）水化：將脫蠟后的切片經(jīng)100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、雙蒸水各3min ；

（3）將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘，流水沖洗；

（4）1%鹽酸酒精分化0.5-1min；

（5）流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻；

（6）碳-酸-鋰飽和水溶液反藍1min后流水沖洗；

（7）入70％和90％酒精中脫水各10min；

（8）入酒精伊紅染色液染色2-3min；。

（9）脫水透明：染色后的切片經(jīng)純酒精脫水，再經(jīng)二甲苯使切片透明；

（10）封片：將已透明的切片滴上中性樹膠，蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后，貼上標箋，切片標本就可使用；

圖像采集

通過掃描，采集圖片。

Masson染色代測

Masson染色是用于顯示組織中纖維的染色方法之一，用于膠原纖維染色而經(jīng)典的技術(shù)方法。一般是用兩種或三種陰離子染料混合，膠原纖維呈藍色，肌纖維，胞質(zhì)，纖維素 角蛋白紅細胞呈紅色，細胞胞核呈藍褐色。用來顯示組織中纖維以及炎性因子的染色方法之一。

常規(guī)病理染色實驗代測的樣本包埋與固定