兔抗綿羊紅細(xì)胞（溶血素）的使用介紹

利用綿羊細(xì)胞與相應(yīng)抗體（溶血素）結(jié)合成的復(fù)合物，可激活血清中的補(bǔ)體，導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解，當(dāng)紅細(xì)胞和溶血素量一定時(shí)，在規(guī)定反應(yīng)的時(shí)間內(nèi)，溶血程度與補(bǔ)體量及活性呈正相關(guān)。在接近50%溶血（CH50）時(shí)，二者之間近似直線(xiàn)關(guān)系，故以50%溶血作為最敏感的判斷終點(diǎn)。以引起50%溶血所需的最小補(bǔ)體量為一個(gè) CH50U，可計(jì)算出待測(cè)血清中總的補(bǔ)體溶血活性，以 CH50U /ml表示。

產(chǎn)品全稱(chēng):凍干兔抗綿羊紅細(xì)胞（凍干溶血素）

規(guī)格：0.5ml*10支

效價(jià)：1:4000

批號(hào)：20230511

保存：-20℃，避光保存，避免反復(fù)凍融

有效期：12個(gè)月

使用方法：臨用前，每瓶加去離子水或者雙蒸水0.5ml重建后立即使用（10小時(shí)內(nèi)），不得反復(fù)使用。

相關(guān)實(shí)驗(yàn)測(cè)定步驟：（僅供參考）

本試驗(yàn)主要反映補(bǔ)體經(jīng)典活化途徑的溶血功能，其結(jié)果與補(bǔ)體C1~C9各組成分的量及活性均有關(guān)。

1．試劑及配制

(1)緩沖生理鹽水：

①貯存液：

Na2HPO4·12H20   2.85g

KH2PO4               0.27g （加蒸餾水至100毫升，4℃保存）

NaCl                    17.00g

②應(yīng)用液（緩沖液）:5毫升貯存液加95毫升蒸餾水，再加10%硫酸鎂0.1毫升。當(dāng)日配制。12小時(shí)內(nèi)使用。

(2)2%綿羊紅細(xì)胞：無(wú)菌采取綿羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以緩沖液

洗3次，并配成2%細(xì)胞懸液。必要時(shí)可用吸光光度法或細(xì)胞計(jì)數(shù)法使懸液細(xì)胞濃度標(biāo)準(zhǔn)化。

(3)溶血素：將本品（效價(jià)1:4000)，用緩沖液做1:2000倍稀釋?zhuān)?ml溶血素加1999毫升緩沖液）。

(4)待測(cè)血清：新鮮血液室溫放置30分鐘，再4℃放置60分鐘，收縮。4℃離心

(3000r/min )10分鐘，取上清，-20℃保存。

2．試管法操作步驟（改良 Mayer 法）

(1)致敏羊紅細(xì)胞：2%綿羊紅細(xì)胞加等量稀釋后的溶血素（1:2000)，混勻，置37℃水浴30分鐘。

(2)稀釋血清：待測(cè)血清0.2ml，加緩沖液3.8ml，稀釋度為1:20。

(3)配制溶血標(biāo)準(zhǔn)管：2%綿羊紅細(xì)胞2ml加8ml蒸餾水，混勻，即為全溶血管。取全溶血管液2ml加緩沖液2m1，即為50%溶血管。

(4)按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置37℃水浴30分鐘。第10管為非溶血對(duì)照。

             補(bǔ)體 CH50 測(cè)定試管法

結(jié)果測(cè)定：取出試管，2000r/min 離心10分鐘，對(duì)照管應(yīng)不溶血。肉眼比色，選與

50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管相近二管，再用分光光度計(jì)測(cè)（波長(zhǎng)542nm、0.5cm比色杯）OD 值，確定與標(biāo)準(zhǔn)管接近者為終點(diǎn)管，然后按下公式計(jì)算CH50值：血清補(bǔ)體CH50 ( U /ml)=(1／血清用量）x 稀釋度。

如第5管為終點(diǎn)管，測(cè)待測(cè)血清中 CH50為66.7U/ml 。血清補(bǔ)體CH50正常值為50-100U/ ml 。

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