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BAFF Western blot實(shí)驗(yàn)檢測

更新時間:2017-10-17      瀏覽次數(shù):1307

BAFF Western blot實(shí)驗(yàn)檢測

上海信帆生物提供BAFF Western blot實(shí)驗(yàn)檢測,歡迎大家!

B細(xì)胞活化因子屬腫瘤壞死因子超家族成員(TNFSF13B),主要由單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞及T細(xì)胞產(chǎn)生,可促進(jìn)B細(xì)胞成熟和分化,在免疫應(yīng)答中起重要作用,并與自身免疫密切相關(guān)。膜型BAFF主要表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞,蛋白酶可使之水解而轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄訠AFF。

通常檢測BAFF的時候可以一起檢測BCL-1,NF-KB等指標(biāo)一起檢測。

Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,然后利用抗體進(jìn)行檢測的方法。對已知表達(dá)蛋白,可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測,對新基因的表達(dá)產(chǎn)物,可通過融合部分的抗體檢測。

BAFF Western blot實(shí)驗(yàn)檢測

與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。

經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。

注意事項(xiàng):

 

1.  一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋白要經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定*條件。
 

2.  顯色液必須新鮮配置使用,zui后加入H2O2。
 

3.  DAB有致癌的潛在可能,操作時要小心仔細(xì)。
 

 

 

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